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gel 만들기~sample Loading 2024. 7. 10.
3. 단백질 정량 준비물: 3DW, Protein assay, BSA, 정량용 판(?), 티슈 * Sample 및 BSA 3시간 해동 후 진행 1. 새 Conical tube에 라벨링  2. protein assay % 맞게 3dw와 섞기 * 25% protein assay(P.A) = 75% 3DW+25%PAex) 5ml 25% PA = 3.75ml 3DW+1.25ml PA* 만들고 시약 바로 정리*PA: 4 ℃ 냉장고 우측에 위치  A: stadard / 25% PA + BSA  = 200㎕ *stadard: 200㎕ -n㎕ / n=0, 2, 4, 6, 8 (n만큼 BSA 채우기)B: 25% PA + Sample = 202㎕  3. 1 well당 200㎕ 25% PA 넣기 4. Standard n수만큼 빼서 휴지에 제.. 2024. 6. 3.
4. SDS-PAGE용 로딩 sample 만들기 준비물: 근육샘플, 3DW, LSB(4X), β-ME, 1.5-e-tube, 아이스박스  *ICE에서 Sample 2시간동안 해동 후 진행 1. 엑셀을 이용하여 필요한 LSB양을 계산한다.  2. 'Dry block heater' 전원 켜기(온도 올라가는데 시간 걸림)  2. 1.5-e-tube에 4X LBS, 샘플 수만큼 라벨링하기   3.1.5-e-tube에 4X LBS와 β-ME 섞기(* 사용설명의 용량 잘 확인하기, 우리가 쓰는 모델의 경우 / 4X LBS: β-ME=9:1)ex. 200μL = 4X LBS 180μL + β-ME 20μL   4. 3DW → LSB(4X Sample buffer) → mix→ 샘플(섞이게 넣기) →  mix → ice 5. heater에 넣기 전에 다시 한 번  .. 2024. 6. 3.
2. Homogenization 준비물: RIFA buffer, 쓰레기통, 1000㎕ 피펫, 팁, 원심분리기?, 아이스박스, 스터... 균일화용 튜브  1. -80도 냉동실에서 적출한 근육 샘플을 얼음 통(?)에 담아둔다.  2. homogenizer용 튜브를 샘플 수에 맞게 준비하고 라벨링한다.(이 때, 1.5-e-tube도 샘플수에 맞게 준비하고 라벨링)  3. 종이컵 사이에 튜브를 끼우고 'TARE' 버튼을 누른 후 샘플을 옮겨 담는다. 4. 샘플 무게를 측정 후 샘플 무게에 맞게 RIFA buffer를 넣는다* buffer volume = sample 무게 x 10* Rat의 경우 근육 크기가 커 powder 작업 후(0.05g 정도 사용) 균질화 과정이 진행되어 14배 정도 사용* mice는 근육 크기가 작아 바로 샘플을 사용.. 2024. 5. 20.
Sampling sampling 준비 1. body weight 측정 2. 마취 10초 (통 꽉 닫지 않기) 3. 30초 정도 이후 발 신경 눌러 마취 확인 4. 전체 에탄올 소독 5. 멸균 주사침으로 손목 고정 6. 가슴쪽 피부 절단> 근막 절단 7. 혈액 체취 용 주사기 확인 8. 심장 내 혈액 체취(혈액 나오는 부분 잘 인지하기) 9. 심장 적출 > PBS 용액에 넣기 > 50% formalin, 50% -80도 10. 간 적출을 위해 밑에 방향으로 절개 11. 양 쪽간 동일한 크기로 자르기(손상 주의) > PBS > 50% formalin, 50% -80도 12. 등쪽 REF 적출 > formalin 13. 부고환/ 난소 옆 EPI 적출 > 무게 측정 >-80도 14. 발목 피부 절개(한바퀴) 15. 허벅지 안쪽.. 2024. 5. 19.
sampling 준비 준비물: 수술도구, 에탄올, PBST(1X), 튜브 with Formalin(8~10ml), 냉동보관용 샘플 튜브, 주사기, 장갑, 액체질소, 스티로품 박스(40% ice), PBST 담을 작은 유리통 실험 준비시 일회용 장갑 필수 착용, 포르마린 사용 시 마스크 필수.  formalin 10도 냉장고에 위치. 직접 튜브에 담을면 됨.액체질소 치대에서 채움. 통 잘 챙겨갈 것아이스박스 출발 전에 40% 얼음 채워서 가기 > 포르말린 튜브 보관주사기: 혈액 채취용(마리수만큼)  formalin 고정: femur, tibia / SOL, EDL, TA(50%), Heart(50%), Liver(50%), REF, BAT(50%) -80°C: GAS, TA(50%), Heart(50%), Liver(50%),.. 2024. 5. 16.
저항성 운동이 OLETF 쥐 시상하부 Leptin receptor (Ob-R), GLUT2 mRNA 및 골격근 GLUT4 mRNA 발현에 미치는 영향 (*) 제 2형 당뇨 - 당뇨병의 90%를 차지하며, 인슐린 저항성 및 만성적 고혈당을 특징으로 하는 비만 관련 대사 질환 - 고혈당(chronic hyperglycemia) > 근육, 심장, 간, 뇌 등을 포함한 주요 기관의 생리적 기능저하 초래 > 다양한 합병증 발생 위험 증가시킴. > 엄격한 혈당관리 요구됨. (*) 시상하부(hypothalamus) (*: 선행연구) - 식욕 중추기관으로, 말초 에너지 상상성 유지를 위한 다양한 신호 통합, 전달 - 지방조직에서 분비된 렙틴, 혈관-뇌 장벽(Blood-Brain-Barrier, BBB) 통과하여 시상하부에 존재하는 수용체와 결합 > 체내 에너지 저장 상태에 관한 정보 제공 > 되먹임 기전(feedback mechanism)에 의해 에너지 섭취 및 체.. 2024. 4. 15.
노화 쥐 해마 CA1에서의 운동을 통한 BDNF 발현 유도 및 PI3KAKT에 의한 synaptic 단백질 발현 단백질 정량분석이라고만 나와있어서 처음에는 이해가 가지 않았으나, 단백질 분류 및 western blot 실행 두 가지를 합쳐놓은 것. 실험동물의 성별이 나와있지 않는데 이는 성별과 해마 사이에 영향이 없는 걸로 판단. * BDNF 1.신경성장인장의 일종으로,신경세포의 성장, 발달, 가소성, 생존 등에 중요한 역할 2. 특히 해마 영역에서 높은 수준으로 유도되며, 학습, 기억,및 인지 능력 등 해마 의존성 작업 수행 능력과 밀접한 관련이 있음. (해마에서의 신경 전달, 신경세포의 흥분성, 시냅스의 가소성 조절하는 주요 인자) * 단백질 합성과정 pro > post > mature 신경세포 mRNA = 핵심 DNA p-AKT (포스포 AKT. 인산화 반응 . 인산이 붙으면 활성화) 2024. 4. 15.
Exercis Training Attenuates Obesity-Induced Skeletal Muscle Remodeling and Mitochondria-Mediated Apoptosis in the Skelatal Muscle 운동 훈련은 골격근에서 비만 유발 골격근 리모델링 및 미토콘드리아 매개 세포 사멸을 약화시킨다. factor 하나로 결론짓는 것보다 상하위 요인도 추가로 조사하면 신뢰도를 높일 수 있음. 이 factor가 실질적인 영향을 미치는지에 대한 연구(확실한 물증 제공 필요)가 없다면 선행연구 제시 필요 횡단면적의 위치가 나와있지 않아서 결과에 대한 신뢰도가 떨어짐. +횡단면적을 보기에는 TYPE 2 섬유가 좋음. Apoptosis 세포자살, 세포자멸사 - 세포예정사의 일종으로 세포 형태와 내부의 생화학적 변화로 말미암아 세포가 죽는 것. - 갑작스럽게 세포가 피해를 입어 야기되는 세포사인 괴사(Necrosis)와 대조적으로 세포자살은 생물체에 해를 끼치지 않으며 생명주기에 유익 - 활성화 메커니즘은 내부 요인에.. 2024. 4. 15.
운동이 외상 후 스트레스 장애를 받고 태어난 새끼 쥐의 인지기능에 미치는 영향 운동과학, 2011 완전 생리학이라기보다 생리+심리 논문 문제점 1. PTSD 유발 쥐(임신쥐)들의 인지 검증이 되지 않아서 신뢰도가 떨어짐(사냥개가 PTSD를 유발했는지 알 수 없음.) 2. PTSD가 해마에 미친 영향에 대한 자료가 없다. 따라서 PTSD 유발 후 해마에 문제가 생겼는지 알 수 없다. + 보통 개들은 쥐를 장난감으로, 고양이는 사냥에 목적을 둠. 사냥개가 충분하 PTSD를 유발하였는지 알 수 없다. 3. 실험 표본의 수가 적어서 PTSD가 나타난지 확인하기 어렵다. 4. 짧은 운동기간으로 운동이 해마에 영향을 미쳤는지 확인하기 어렵다. 2024. 4. 15.
Effect of antioxidant supplementation on skeletalmuscle and metabolic profile in aging mice 노화 생쥐에서 항산화제 보충이 골격근 및 대사 프로파일에 미치는 영향 Effect of antioxidant supplementation on skeletal.pdf 1.38MB 노화에 따른 근위축 산화스트레스 관점에서 식물성 항산화 물질은 약물에 비해 효과가 느리고 장기간 섭취가 필요함. > 제한점에서 언급 여성호르몬 관련한 실험이 아니라면 암컷 쥐 사용시 호르몬 영향으로 실험 결과 달라질 수 있음. 실험주제와 관련하여 의미있는 결과는 산화스트레스가 근위축에 영향을 준다는 것 뿐. 나머지 실험들은 유의미한 결과가 없다. GAS의 경우 지근과 속근이 합쳐져 있어 분리해서 분석이 필요하나, 논문에서는 분리해서 분석하지 않아서 실험 결과를 신뢰할 수 없다. 운동활성을 측정도구 없이 활동성으로 측정하였기 때문.. 2024. 4. 15.
[과거의 근력훈련 경험이 장기간 훈련중단 후 재훈련시 흰쥐 가자미근의 횡단면적과 단백질 함량에 미치는 영향] 논문 리뷰가 처음이라 논문 요약수준의 ppt를 만들어서 발표했는데 결과는 처참했다. 논문 리뷰는 단순히 논문 요약을 하는 것이 아니라 이 논문의 신뢰도와 타당도를 의심하라는 뜻이었다. 1. 이 논문의 경우 실험동물이 female.rat으로 진행된다. 암컷을 사용할 경우, 호르몬의 영향이 실험결과에 영향을 미칠 수 있기 때문에, 유전이나 여성관련 연구가 아니면 수컷을 사용하여 연구하는 것이 결과를 일반화하기에 적합하다. 이 논문의 경우 암컷쥐로 실험이 진행되었기 때문에 실험결과를 완벽하게 신뢰하기 어렵다. 2. 마이오신 아형 중간에 관한 이야기와 근육타입에 대한 이야기가 나와서 혼란이 있었는데 이 논문은 마이오신 아형과 관련이 없다. 아마 다른 논문에서 마이오신 아형에 관해 실험이 진행되었고 이 실험은 후.. 2024. 4. 15.