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실험/실험과정6

gel 만들기~sample Loading 2024. 7. 10.
3. 단백질 정량 준비물: 3DW, Protein assay, BSA, 정량용 판(?), 티슈 * Sample 및 BSA 3시간 해동 후 진행 1. 새 Conical tube에 라벨링  2. protein assay % 맞게 3dw와 섞기 * 25% protein assay(P.A) = 75% 3DW+25%PAex) 5ml 25% PA = 3.75ml 3DW+1.25ml PA* 만들고 시약 바로 정리*PA: 4 ℃ 냉장고 우측에 위치  A: stadard / 25% PA + BSA  = 200㎕ *stadard: 200㎕ -n㎕ / n=0, 2, 4, 6, 8 (n만큼 BSA 채우기)B: 25% PA + Sample = 202㎕  3. 1 well당 200㎕ 25% PA 넣기 4. Standard n수만큼 빼서 휴지에 제.. 2024. 6. 3.
4. SDS-PAGE용 로딩 sample 만들기 준비물: 근육샘플, 3DW, LSB(4X), β-ME, 1.5-e-tube, 아이스박스  *ICE에서 Sample 2시간동안 해동 후 진행 1. 엑셀을 이용하여 필요한 LSB양을 계산한다.  2. 'Dry block heater' 전원 켜기(온도 올라가는데 시간 걸림)  2. 1.5-e-tube에 4X LBS, 샘플 수만큼 라벨링하기   3.1.5-e-tube에 4X LBS와 β-ME 섞기(* 사용설명의 용량 잘 확인하기, 우리가 쓰는 모델의 경우 / 4X LBS: β-ME=9:1)ex. 200μL = 4X LBS 180μL + β-ME 20μL   4. 3DW → LSB(4X Sample buffer) → mix→ 샘플(섞이게 넣기) →  mix → ice 5. heater에 넣기 전에 다시 한 번  .. 2024. 6. 3.
2. Homogenization 준비물: RIFA buffer, 쓰레기통, 1000㎕ 피펫, 팁, 원심분리기?, 아이스박스, 스터... 균일화용 튜브  1. -80도 냉동실에서 적출한 근육 샘플을 얼음 통(?)에 담아둔다.  2. homogenizer용 튜브를 샘플 수에 맞게 준비하고 라벨링한다.(이 때, 1.5-e-tube도 샘플수에 맞게 준비하고 라벨링)  3. 종이컵 사이에 튜브를 끼우고 'TARE' 버튼을 누른 후 샘플을 옮겨 담는다. 4. 샘플 무게를 측정 후 샘플 무게에 맞게 RIFA buffer를 넣는다* buffer volume = sample 무게 x 10* Rat의 경우 근육 크기가 커 powder 작업 후(0.05g 정도 사용) 균질화 과정이 진행되어 14배 정도 사용* mice는 근육 크기가 작아 바로 샘플을 사용.. 2024. 5. 20.
Sampling sampling 준비 1. body weight 측정 2. 마취 10초 (통 꽉 닫지 않기) 3. 30초 정도 이후 발 신경 눌러 마취 확인 4. 전체 에탄올 소독 5. 멸균 주사침으로 손목 고정 6. 가슴쪽 피부 절단> 근막 절단 7. 혈액 체취 용 주사기 확인 8. 심장 내 혈액 체취(혈액 나오는 부분 잘 인지하기) 9. 심장 적출 > PBS 용액에 넣기 > 50% formalin, 50% -80도 10. 간 적출을 위해 밑에 방향으로 절개 11. 양 쪽간 동일한 크기로 자르기(손상 주의) > PBS > 50% formalin, 50% -80도 12. 등쪽 REF 적출 > formalin 13. 부고환/ 난소 옆 EPI 적출 > 무게 측정 >-80도 14. 발목 피부 절개(한바퀴) 15. 허벅지 안쪽.. 2024. 5. 19.
sampling 준비 준비물: 수술도구, 에탄올, PBST(1X), 튜브 with Formalin(8~10ml), 냉동보관용 샘플 튜브, 주사기, 장갑, 액체질소, 스티로품 박스(40% ice), PBST 담을 작은 유리통 실험 준비시 일회용 장갑 필수 착용, 포르마린 사용 시 마스크 필수.  formalin 10도 냉장고에 위치. 직접 튜브에 담을면 됨.액체질소 치대에서 채움. 통 잘 챙겨갈 것아이스박스 출발 전에 40% 얼음 채워서 가기 > 포르말린 튜브 보관주사기: 혈액 채취용(마리수만큼)  formalin 고정: femur, tibia / SOL, EDL, TA(50%), Heart(50%), Liver(50%), REF, BAT(50%) -80°C: GAS, TA(50%), Heart(50%), Liver(50%),.. 2024. 5. 16.

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