4. SDS-PAGE용 로딩 sample 만들기

준비물: 근육샘플, 3DW, LSB(4X), β-ME, 1.5-e-tube, 아이스박스

 

 

*ICE에서 Sample 2시간동안 해동 후 진행

 
1. 엑셀을 이용하여 필요한 LSB양을 계산한다.
 

 
2. 'Dry block heater' 전원 켜기(온도 올라가는데 시간 걸림)
 

 
2. 1.5-e-tube에 4X LBS, 샘플 수만큼 라벨링하기
 

4x Laemmli sample buffer(4x LSB), β-mercaptoethanol

 
 
3.1.5-e-tube에 4X LBS와 β-ME 섞기
(* 사용설명의 용량 잘 확인하기, 우리가 쓰는 모델의 경우 / 4X LBS: β-ME=9:1)
ex. 200μL = 4X LBS 180μL + β-ME 20μL
  

 

4. 3DW → LSB(4X Sample buffer) → mix

→ 샘플(섞이게 넣기) →  mix → ice
 
5. heater에 넣기 전에 다시 한 번  mix

 

6. 클립 고정 후(뚜껑방향으로 클립 결합) heater 100도 10분
* 목적에 따라 시간 및 온도 변경
* 튜브 되도록 동시에 기계에 넣어야 오차가 적어짐
 
7. 10분 후 ice에 넣어 온도 낮춰주기 

 

 

8. 기계에 넣어 튜브 내 수분이 아래로 잘 모이게 하기

 

9. 기계로 mix 후 -20도 냉동실 보관

 

10. 사용한 기계 모두 끄고 자리 정리